傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡是什么樣子的？

傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的實(shí)際上是場光源，由于光散射，在所觀察的視野內(nèi)，樣品上的每一點(diǎn)都同時(shí)被照射并成像，入射光照射到整個(gè)細(xì)胞的一定厚度，位于焦平面外地反射光也可以通過物鏡而成像，使圖像的信噪比降低，影響了圖像的清晰度和分辨率。

此外，傳統(tǒng)的額光學(xué)金相顯微鏡也只能對局部作平面成像，而LSCM脫離了這種模式，采用激光束做光源，激光束經(jīng)照明針孔，經(jīng)由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上，對標(biāo)本內(nèi)焦平面上每一點(diǎn)進(jìn)行掃描。

然后，激發(fā)出得熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡，通過探測針孔時(shí)先聚焦，聚焦后的光被光電倍增管探測收集，并將信號輸送到計(jì)算機(jī)，在彩色顯示器上顯示圖像。

在這個(gè)光路中，只有焦平面啥樣的光才能穿過探測針孔，焦平面以外區(qū)域射來的光線在探測小孔平面是離焦的，不能通過小孔。因此，非觀察點(diǎn)的北京呈黑色，反差增加，成像清晰。由于照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點(diǎn)不會再探測針孔處成像，即共聚焦。以激光做光源并對樣品進(jìn)行掃描，在此過程中兩次聚焦故成為激光共聚焦金相顯微鏡。

現(xiàn)代的共聚焦顯微鏡，圖像可通過PMT輸出產(chǎn)生，也克用數(shù)字式電荷耦合器件的相機(jī)捕獲，并可直接用計(jì)算機(jī)圖像系統(tǒng)進(jìn)行處理，在高分辨率視頻顯示器呈現(xiàn)，同時(shí)可將所有數(shù)據(jù)儲存在硬盤中。